Грант Российского научного фонда (проект № 24-25-20155)

Руководитель: Курдюков Е.Е., к.фарм.н., доцент кафедры "Общая и клиническая фармакология"

Коллектив исполнителей: Митишев А.В., Водопьянова О.А.

Цель проекта: поиск и комплексное исследование ряда лекарственных растений, микроводорослей, обладающих антимикробным, противовоспалительным действием, а также разработка и обоснование состава нового фитосредства.

Задачи проекта:

1. теоретически и экспериментально обосновать выбор компонентного состава разрабатываемого фитосредства (лекарственное растительное сырье с высоким содержанием фенольных, тритерпеновых соединений и жирных кислот листья стевии Ребо, листья лофанта тибетского, хлорелла и спирулина);
2. выбрать способ подготовки сырья к экстрагированию (измельчение, фракционирование, предварительная обработка химическими реагентами);
3. подобрать экстрагент, методы и параметры экстракции, выбрать тип экстракта (сухой, густой, жидкий) в зависимости физико-химических свойств биологически активных соединений для индивидуальных извлечений из растений и микроводорослей;
4. подобрать экстрагент, методы и параметры экстракции, выбрать тип экстракта (сухой, густой, жидкий) в зависимости физико-химических свойств биологически-активных соединений для комплексных извлечений из смеси растений и микроводорослей;
5. выявить и охарактеризовать биологически активные соединения экстрактов лекарственного растительного сырья;
6. провести исследования антибактериальной и противовоспалительной активности экстрактов лекарственных растений и микроводорослей;
7. разработать методики качественного и количественного анализа нового фитосредства, провести сравнительный анализ содержания биологически активных соединений в полученных образцов;
8. разработать методы стандартизации экстрактов лекарственного растительного сырья и микроводорослей;
9. предложить и обосновать технологию получения нового фитосредства;
10. провести токсикологические исследования экстрактов;
11. провести сравнительные исследования антибактериальной и противовоспалительной активностей с существующими на рынке прямыми и косвенными аналогами;
12. разработать методы стандартизации нового фитосредства;
13. разработать проекты нормативной документации на новое фитосредство.

Результаты проекта

Теоретически и экспериментально обоснован выбор компонентного состава разрабатываемого фитосредства с учетом содержания целевых групп биологически активных соединений, обладающих противомикробными и противовоспалительными эффектами, а также оптимальные условия экстракции фенилпропаноидов и флавоноидов (время экстракции, экстрагент, соотношение сырья:экстрагента) из лекарственного сырья буквицы лекарственной, стевии Ребо, лофанта тибетского, гречихи красностебельной, спирулины и хлореллы. Подобраны условия качественного анализа методом тонкослойной хроматографии для подтверждения наличия флавоноидов и фенилпропаноидов в исследуемых растениях. В экстрактах лекарственного сырья гречихи, буквицы, лофанта, стевии было выявлено и подтверждено наличие флавоноидов (рутин, цинарозид, лютеолин-7-глюкозид) и фенилпропаноидов (хлорогеновая кислота). Полученные извлечения проявляли антибактериальную активность в отношении всех тестируемых грамположительных и грамотрицательных бактерий. Учитывая данные исследований, наиболее чувствительными являются E. сoli, S. mutans, B.subtilis и S. typhi, S. aureus, Enterococcus sp., Myxococcus sp., Salmonella enteritidis и Pseudomonas aeruginosa. Противовоспалительная активность экстрактов, определенная методом ингибирования ксантин – ксантиноксидазы, варьировала от 28,5% до 36,37%. Ингибирование фермента гиалуронидазы достигало 65,39%. Стандартизацию травы лофанта, буквицы, гречихи и листьев стевии проводили по содержанию фенилпропаноидов методом прямой спектрофотометрии в пересчете на хлорогеновую кислоту, дающую максимум поглощения при 330±2 нм, и по содержанию флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на цинарозид (385 нм), лютеолин-7-глюкозид (390 нм), рутин (410 нм), цинарозид (400 нм) соответственно. Биомассу хлореллы и спирулины стандартизовали по содержанию флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии в пересчете на рутин (410 нм). Предложена и обоснована технология получения нового фитосредства. Изучили острую, подострую, хроническую токсичность лекарственного растительного сырья и разрабатываемого фитосредства. На основании полученных результатов, экстракты лекарственных растений и фтосредства классифицированы как малотоксичное вещество (IV класс опасности) в соответствии с ГОСТ 12.1.007-76. Проведено исследование противовоспалительной активности разрабатываемого фитосредства. Экстракт in vivo обладал статистически значимым противовоспалительным эффектом. Он подавлял развитие экссудативной фазы воспаления на 72% по сравнению с контрольной группой животных. Разработана нормативная документация.

Рисунок 1. Электронный спектр стандартного образца лютеолин-7-глюкозида с добавлением алюминия хлорида раствора 3% (2)
и извлечения из надземной части Betonica officinalis с добавлением алюминия хлорида раствора 3% (1)

Рисунок 2. Электронный спектр стандартного образца хлорогеновой кислоты (1) и извлечения из надземной части Lophantus tibeticus (2)